РАДИОИММУННЫЙ АНАЛИЗ, РИА
(Radioimmunoassay)
—метод выявления антигенов и антител, основанный на определении комплекса антиген-антитело за счет введения в один из компонентов реакции радиоактивной метки с последующей ее детекцией. Основой проведения любого варианта РИА служит сравнительное определение единиц счета импульсов, зарегистрированных при исследовании в идентичных условиях стандартных и измеряемых образцов. При выявлении антигенов и антител для диагностики и изучения вирусных гепатитов применяется твердофазный вариант иммунохимического анализа, который может проводиться в различных вариантах постановки.
Радиоиммунный анализ обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Так, например, с помощью коммерческого набора фирмы "ЭББОТТ" — Австрия II-I 125 удается выявлять HBsAg в концентрациях до 0,1 нг/мл. К преимуществам метода можно отнести возможность стандартизации и автоматизации метода с получением ответов в цифровом выражении. Недостатком метода являются ограничения, определяемые режимом работы с радиоактивным материалом, и относительно короткий срок годности диагностического набора, что связано с распадом радиоактивной метки.
Диагностические наборы для выявления различных антигенов вирусов гепатитов А, В и D и антител к ним выпускаются фирмой "Изотоп" (Ташкент) и некоторыми зарубежными фирмами (например, фирмой "ЭББОТТ"). В качестве твердой фазы применяются полистироловые шарики ("ЭББОТТ") или пробирки ("Изотоп"). Для метки антител или антигенов чаще всего используется изотоп I 125 , который имеет период полураспада 60 дней и высокую удельную радиоактивность. Измерение радиоактивной метки, т.е. излучения, проводится на специальных счетчиках — радиоспектрометрах. Подсчет радиоактивных импульсов как в контрольных, так и исследуемых образцах проводится в единое фиксированное время, обычно в течение 1 минуты. При анализе результатов реакции необходимо учитывать наличие фона радиоактивности, который может влиять на конечный результат реакции. Причинами повышенного фона могут быть: загрязнение контейнера или гнезда для пробы; неправильная настройка прибора; наличие источника сильного излучения вблизи прибора.
Для подтверждения положительного результата, полученного при первичном скрининге образцов, рекомендуется повторное исследование РИА или в альтернативном тесте. При обнаружении HBsAg необходимо проводить конфирмационный тест.